高效液相色譜儀的各個系統(tǒng)說明

關(guān)于高效液相色譜儀有著五大類的系統(tǒng)，相輔相成完成各種功能價值，除此以外還各自有著不同的特點——高效液相色譜儀的主要系統(tǒng)構(gòu)成及特點，包括輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等，并且各自有著與眾不同之處：

第一．輸液系統(tǒng)，

高效液相色譜儀的輸液系統(tǒng)包括高壓泵、流動相貯存器和梯度儀三部分。流動相貯存錯和梯度儀，可使流動相隨固定相和樣品的性質(zhì)而改變，包括改變洗脫液的極性、離子強度、PH值，或改用競爭性抑制劑或變性劑等。這就可使各種物質(zhì)(即使僅有一個基團(tuán)的差別或是同分異構(gòu)體)都能獲得有效分離。

高壓泵的一般壓強為l．47～4．4X107Pa，流速可調(diào)且穩(wěn)定，當(dāng)高壓流動相通過層析柱時，可降低樣品在柱中的擴(kuò)散效應(yīng)，可加快其在柱中的移動速度，這對提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。

第二，就是數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)該系統(tǒng)可對測試數(shù)據(jù)進(jìn)行采集、貯存、顯示、打印和處理等操作，使樣品的分離、制備或鑒定工作能正確開展。

第三.分離系統(tǒng)，相對來說分離系統(tǒng)由色譜柱、連接管和恒溫器等部分構(gòu)成，色譜柱一般長度為10～50cm(需要兩根連用時，可在二者之間加一連接管)，內(nèi)徑為2～5mm，由"不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成，住內(nèi)裝有直徑為5～10μm粒度的固定相(由基質(zhì)和固定液構(gòu)成)．固定相中的基質(zhì)是由機(jī)械強度高的樹脂或硅膠構(gòu)成，它們都有惰性(如硅膠表面的硅酸基因基本已除去)、多孔性(孔徑可達(dá)1000?)和比表面積大的特點，加之其表面經(jīng)過機(jī)械涂漬(與氣相色譜中固定相的制備一樣)，或者用化學(xué)法偶聯(lián)各種基因(如磷酸基、季胺基、羥甲基、苯基、氨基或各種長度碳鏈的烷基等)或配體的有機(jī)化合物。因此，這類固定相對結(jié)構(gòu)不同的物質(zhì)有良好的選擇性。

另外，固定相基質(zhì)粒小，柱床易達(dá)到均勻、致密狀態(tài)，易降低渦流擴(kuò)散效應(yīng)�；|(zhì)粒度小，微孔淺，樣品在微孔區(qū)內(nèi)傳質(zhì)短。這些對縮小譜帶寬度、提高分辨率是有益的。根據(jù)柱效理論分析，基質(zhì)粒度小，塔板理論數(shù)N就越大。這也進(jìn)一步證明基質(zhì)粒度小，會提高分辨率的道理。再者，高效液相色譜儀的恒溫器可使溫度從室溫調(diào)到60C，通過改善傳質(zhì)速度，縮短分析時間，就可增加層析柱的效率。

第四．進(jìn)樣系統(tǒng)，一般采用隔膜注射進(jìn)樣器或高壓進(jìn)樣間完成進(jìn)樣操作，進(jìn)樣量是恒定的。這對提高分析樣品的重復(fù)性是有益的。

第五．檢測系統(tǒng)高效液相色譜儀常用的檢測器有紫外檢測器、示差折光檢測器和熒光檢測器三種。

     1.紫外檢測器主要擁有這樣的特點：使用面廣(如蛋白質(zhì)、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用)；靈敏度高(檢測下限為10-10g／ml)；線性范圍寬；對溫度和流速變化不敏感；可檢測梯度溶液洗脫的樣品。

　　2.示差折光檢測器這一系統(tǒng)通用性強、操作簡單，但靈敏度低(檢測下限為10-7g／ml)，流動相的變化會引起折光率的變化，因此，它既不適用于痕量分析，也不適用于梯度洗脫樣品的檢測。

　　3.熒光檢測器，凡具有熒光的物質(zhì)，在一定條件下，其發(fā)射光的熒光強度與物質(zhì)的濃度成正比。因此，這一檢測器只適用于具有熒光的有機(jī)化合物(如多環(huán)芳烴、氨基酸、胺類、維生素和某些蛋白質(zhì)等)的測定，其靈敏度高(檢測下限為10-12～10-14g／ml)，痕量分析和梯度洗脫作品的檢測均可采用。

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